ⅠNukleïensuuriinleiding
Nukleïensuur word verdeel in deoksiribonukleïensuur (DNA) en ribonukleïensuur (RNA), waaronder RNA verdeel word in ribosomale RNA(rRNA), boodskapper-RNA(mRNA) en oordrag-RNA(tRNA) volgens sy verskillende funksies.DNA is hoofsaaklik in die kern, mitochondria en chloroform gekonsentreer, terwyl RNA hoofsaaklik in die sitoplasma versprei word.As die materiële basis van geenuitdrukking speel nukleïensuurekstraksie 'n uiters belangrike rol in molekulêre biologie navorsing en kliniese molekulêre diagnose.Die konsentrasie en suiwerheid van nukleïensuurekstraksie sal die daaropvolgende PKR, volgordebepaling, vektorkonstruksie, ensiemvertering en ander eksperimente direk beïnvloed.
Ⅱ Nukleïensuur-ekstraksie- en suiweringsmetode
① Fenol/chloroform ekstraksie metode
Fenol/chloroform-ekstraksie is 'n klassieke metode vir DNA-ekstraksie, wat hoofsaaklik twee verskillende organiese oplosmiddels gebruik om die monsters te behandel, die oplossing van DNA-gebaseerde nukleïensuur in die waterfase, lipiede in die organiese fase, en proteïene tussen die twee fases.Hierdie metode het die voordele van lae koste, hoë suiwerheid en goeie effek.Die nadele is ingewikkelde werking en lang tyd.
② Trizol-metode
Trizol-metode is 'n klassieke metode vir RNA-ekstraksie.Die Trizol-metode word na sentrifugering met chloroform in waterfase en organiese fase verdeel, waarin die RNA in die waterfase opgelos word, die waterfase na 'n nuwe EP-buis oorgedra word, presipitasie word verkry nadat isopropanol bygevoeg is, en dan etanolsuiwering.Hierdie metode is geskik vir RNA-ekstraksie uit dierlike weefsels, selle en bakterieë.
③ Sentrifugale kolom suiweringsmetode
Sentrifuge kolom suiwering metode kan DNA spesifiek adsorbeer deur spesiale silikon matriks adsorpsie materiale, terwyl RNA en proteïen glad kan slaag, en dan gebruik hoë sout lae PH om nukleïensuur, lae sout hoë PH waarde eluering te kombineer om nukleïensuur te skei en te suiwer.Die voordele is hoë suiweringskonsentrasie, hoë stabiliteit, geen behoefte aan organiese oplosmiddel nie, en lae koste.Die nadeel is dat dit stap vir stap gesentrifugeer moet word, meer operasiestappe.
④ Magnetiese krale metode
Die magnetiese krale-metode is om die selweefselmonster deur die lysaat te verdeel, die nukleïensuur in die monster vry te stel, en dan word die nukleïensuurmolekules spesifiek op die oppervlak van die magnetiese kraal geadsorbeer, terwyl onsuiwerhede soos proteïene en suikers in gelaat word. die vloeistof.Deur die stappe van selweefselsplitsing, magnetiese kraalbinding met nukleïensuur, nukleïensuurspoeling, nukleïensuureluering, ens., word uiteindelik suiwer nukleïensuur verkry.Die voordele is eenvoudige werking en kort tyd gebruik, sonder die behoefte van stap sentrifugering.Dit het lae tegniese vereistes en kan outomatiese en massawerking realiseer.Die spesifieke kombinasie van magnetiese kraal en nukleïensuur maak die onttrekte nukleïensuur met hoë konsentrasie en suiwerheid.Die nadeel is dat die huidige markprys relatief duur is.
⑤ Ander metodes
Benewens die bogenoemde vier metodes, is daar kookkraking, gekonsentreerde soutmetode, anioniese skoonmaakmiddelmetode, ultrasoniese metode en ensiematiese metode, ens.
Ⅲ Tipe nukleïensuur-ekstraksie
Foregene het die wêreld se voorste direkte PCR-platform, dubbelkolom RNA-isolasieplatform (slegs DNA + RNA).Die belangrikste produkte sluit in DNA/RNA-isolasiestelle, PCR en direkte PCR-reagense molekulêre laboratoriumreagense-reeks.
① Totale RNA-ekstraksie
Totale RNA ekstraksie monsters sluit bloed, selle, dierweefsels, plante, virusse, ens. Hoë suiwerheid en hoë konsentrasie van totale RNA kan verkry word deur totale RNA ekstraksie, wat gebruik kan word in RT-PCR, skyfie analise, in vitro vertaling, molekulêre kloning, Dot Blot en ander eksperimente.
Foregene verwantRNA-isolasiestelle
Diere Totale RNA Isolasie Kit--Onttrek vinnig en doeltreffend hoë-suiwer en hoë kwaliteit totale RNA uit verskeie diereweefsels.
Seltotaal-RNA-isolasiestel--Hoogs gesuiwerde en hoë kwaliteit totale RNA kan binne 11 minute van verskeie gekweekte selle verkry word.
Plant Totale RNA Isolasie Kit--Onttrek vinnig hoëgehalte totale RNA uit plantmonsters met 'n lae polisakkaried- en polifenoleinhoud.
Virale RNA-isolasiestel--Isoleer en suiwer virale RNA vinnig uit monsters soos plasma, serum, selvrye liggaamsvloeistowwe en selkultuursupernatante.
② Genomiese DNA-ekstraksie
Genomiese DNA-ekstraksiemonsters sluit grond, ontlasting, bloed, selle, dierweefsels, plante, virusse, ens. Genomiese DNA-ekstraksie kan gebruik word in ensiemvertering, DNA-biblioteekkonstruksie, PCR, teenliggaampiebereiding, Western klad hibridisasie analise, geen chip, hoë -deurvloei-volgordebepaling en ander eksperimente.
Foregene verwantDNA-isolasiestelle
Diereweefsel DNA-isolasiestel--Vinnige ekstraksie en suiwering van genomiese DNA uit verskeie bronne, soos diereweefsel, selle, ens.
Bloed DNA Midi Kit (1-5ml)-- Suiwer hoëgehalte genomiese DNA vinnig uit antistollingsbloed (1-5 ml).
Buccale depper/FTA-kaart DNA-isolasiestel-- Suiwer hoëgehalte genomiese DNA vinnig uit buccale depper/FTA-kaartmonsters.
Plant DNA-isolasiestel--Suiwer vinnig en verkry hoëgehalte genomiese DNA van plantmonsters (insluitend polisakkariede en polifenol plantmonsters)
③ Plasmied ekstraksie
Plasmied is 'n soort sirkelvormige klein molekule DNA in selle, wat 'n algemene draer is vir DNA-rekombinasie.Die metode van plasmiedekstraksie is om RNA te verwyder, plasmied van bakteriese genomiese DNA te skei en proteïen en ander onsuiwerhede te verwyder om relatief suiwer plasmied te verkry.
Algemene Plasmid Mini Kit- Suiwer vinnig hoë-gehalte plasmied DNA van getransformeerde bakterieë vir roetine molekulêre biologie eksperimente soos transformasie en ensiem vertering
④ Ander ekstraksietipes, miRNA-ekstraksie, ens.
Diere miRNA-isolasiestel- Onttrek vinnig en doeltreffend klein RNA-fragmente van 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA uit verskeie dierweefsels en selle
Ⅳ Vereistes vir nukleïensuurekstraksie en suiwering het gevolgs
① Om die integriteit van die primêre struktuur van nukleïensuur te verseker.
② Verminder die interferensie van proteïene, suikers, lipiede en ander makromolekules
③ Daar behoort geen organiese oplosmiddel of hoë konsentrasie metaalione te wees wat die ensiem in nukleïensuurmonsters kan inhibeer nie.
④ RNA en ander nukleïensuur kontaminasie moet uitgeskakel word wanneer DNA onttrek word, en omgekeerd.
Pos tyd: Nov-24-2022
